Серологический маркер гепатита с

Версия для людей с ограничением по зрению. Это исследование является скрининговым для выявления HCV- инфицированных пациентов. Антитела появляются в первые 2 недели заболевания и свидетельствуют о возможной инфицированности вирусом или перенесённой инфекции.

Дорогие читатели! Наши статьи рассказывают о типовых способах решения проблем со здоровьем, но каждый случай носит уникальный характер.

Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему - начните с программы похудания. Это быстро, недорого и очень эффективно!


Узнать детали

Лабораторная диагностика гепатита C

Михайлов, Институт эпидемиологии и микробиологии им. При постановке диагноза "гепатит С" необходимо учитывать следующие наиболее важные факторы:. Основой лабораторной диагностики гепатита С служат знания о ВГС, его репликации, информация о динамике появления и исчезновения маркеров инфицирования, а также современные иммунохимические и молекулярно-биологические методы детекции антигенов, антител и нуклеиновых кислот.

ВГС впервые был идентифицирован в году, когда группа исследователей во главе с М. Houghton и Choo Q. L, применив новые молекулярнобиологические методы исследования, клонировала и секвинировала геном вируса [I]. Частица вируса гепатита С имеет сферическую форму со средним диаметром около 50 нм [2,3]. Попытки визуального обнаружения и изучения строения вируса гепатита С предпринимались с момента открытия вируса, однако до сих пор отсутствуют хорошо документированные результаты этих исследований, что, возможно, связано с трудностями накопления вирусных частиц в необходимых количествах.

Нуклеокапсид содержит РНК вируса гепатита С. Геном вируса представлен однонитевой линейной молекулой РНК положительной полярности, протяженностью около нуклеотидов. Организация генома ВГС подобна другим флавивирусам. В нем выделяют две зоны, кодирующие структурные и неструктурные функциональные белки.

Ген ВГС имеет одну открытую рамку считывания ОРС , единый полипептид приблизительно в аминокислот , который под действием вирусных и клеточных протеаз нарезается на структурные и неструктурные белки. Структурные элементы HCV. Выявлено три формы С-белка ВГС: полноразмерная р21 с молекулярной массой - 21 kD, усеченная р19 и форма р16 , обнаруженная в ядрышках инфицированных гепатоцитов. На своей поверхности С-белок несет различные высококонсервативные В-клеточные эпитопы, существование которых чрезвычайно важно для выявления антител к ВГС в процессе лабораторной диагностики гепатита С.

Эти белки имеют несколько участков N-гликозилирования; в Е1 белке определено до 6 таких участков, а в Е2 - В участке Е2 заключена информация о небольшом белке - р7, который в структуре вируса не обнаружен. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей РНК изолятов ВГС, полученных в различных регионах мира и даже в процессе заболевания от одного и того же пациента, выявил основную особенность этого вируса - высокую гетерогенность РНК.

Положение о значительной генетической вариабельности РНК ВГС легло в основу теорий, объясняющих: длительное иногда пожизненное носительство вируса, частое развитие хронического заболевания, трудности в терапии и создании эффективных вакцинных препаратов. В настоящее время определено 6 основных генотипов и свыше субтипов ВГС.

Считается, что пациенты, инфицированные генотипом 1 особенно 1в , отвечают хуже на лечение по сравнению с пациентами, инфицированными другими генотипами вируса. Эти мутантные формы могут способствовать более активной репликации или могут помогать вирусу уклоняться от иммунного ответа организма и потенциально влиять на исход острой инфекции, различия в течении заболевания и ответе на интерферонотерапию [8].

После открытия вируса ВГС и определения его роли в развитии посттрансфузионного гепатита - "ни А, ни В" перед исследователями стояла задача разработать методы, способные выявлять лиц с ВГС и пригодные для диагностики острого и хронического гепатита С. Было установлено, что антигены ВГС циркулируют в чрезвычайно низких концентрациях, и очевидно, что методический уровень конца х годов XX века, применяемый для детекции вирусных антигенов, был явно недостаточен.

В году группа исследователей фирмы "Chiron Corporation" под руководством Q-L. Choo осуществила клонирование РНК ВГС и получила иммунореактивные олигопептиды, вступающие в реакцию с антителами, циркулирующими в крови больных хроническим гепатитом "ни А, ни В". Эти олигопептиды стали основой диагностических препаратов для выявления антител к ВГС. Это определило быстрый прогресс в разработке и промышленном выпуске диагностических препаратов. Основным методом, применяемым для детекции анти-ВГС, стал твердофазный иммуноферментный анализ, как метод, отвечающий требованиям практического здравоохранения -т.

Учитывая, что ВГС персистирует в крови больных острым и хроническим гепатитом С одновременно с анти-ВГС, внимание разработчиков диагностических препаратов концентрировалось на создании тест-систем для детекции антител, обеспечивающих максимально полное выявление носителей вируса и максимально ранние сроки диагностики острой инфекции.

Многообразие антигенов и антигенных детерминант, кодированных структурной и неструктурной зоной РНК ВГС, определило направление в конструировании диагностических препаратов выбором и аранжировкой олигопептидов, применяемых для их создания. За время, прошедшее с момента открытия ВГС, созданы диагностические системы трех поколений таблица 1. Введение дополнительных пептидов, прежде всего с Core , в диагностические препараты 2-го и 3-го поколения позволило решить главную задачу, то есть увеличить чувствительность, специфичность и, самое главное, выявляемость анти-ВГС.

По мнению некоторых исследователей, присутствие этого пептида не имеет принципиального значения для улучшения качества диагностического препарата. Однако антитела к NS5 могут быть выявлены в более ранние сроки инфекции, что улучшает качество лабораторной диагностики острого гепатита С.

В настоящее время во всем мире, в том числе и в России, применяются диагностические препараты 3-го поколения. Пептиды, применяемые в диагностических препаратах, получены при помощи рекомбинантной технологии например, диагностикумы фирм: "Диагностические препараты", г. Нижний Новгород; "Вектор" г. Новосибирск; "Roche"; "Abbott" и др. Санкт-Петербург; "Organon" и др. Диагностикумы, в которых одновременно использованы оба вида пептидов, получили обозначения, как препараты 4-го поколения.

По своим характеристикам эти препараты не обладают значимыми различиями. Сравнительные испытания, регулярно проводимые МЗ России, продемонстрировали сопоставимую чувствительность диагностических препаратов отечественных и зарубежных производителей. George с соавт. Причем у таких пациентов в процессе наблюдения может регистрироваться серореверсионный эффект, то есть регистрация позитивного результата после серонегативного анти-ВГС периода [14].

Одна из наиболее важных проблем при проведении исследований на наличие анти-ВГС - ложнопозитивные результаты. Их появление может быть связано с неспецифическим взаимодействием компонентов реакции, возможными перекрестными реакциями с другими вирусными антигенами и многими другими факторами. Повышенный уровень таких результатов отмечен среди больных онкологическими и аутоиммунными заболеваниями, лиц с иммунодефицитными состояниями и больных сифилисом [16,17].

Существование ложнопозитивных результатов ставит перед лабораторным работником задачу их разграничения с истинным выявлением анти-ВГС. Для разграничения ложнопозитивных образцов и образцов, действительно содержащих антитела к ВГС, разработаны дополнительные Supplemental тесты.

Анти-ВГС взаимодействуют с адсорбированными антигенами с помощью меченных ферментом антител против Ig G человека с последующей их детекцией при помощи субстратного комплекса. Помимо иммуноблота в качестве дополнительных тестов также используют диагностические препараты для выявления анти-ВГС против конкретных антигенов, кодированных различными зонами РНК ВГС ["Спектр 4" "Имбио", г. Нижний Новгород]. Разработка и внедрение этих тестов идет параллельно с внедрением скрининговых тестов для выявления анти-ВГС, повторяя принцип расширяющегося спектра использованных пептидов в каждом последующем поколении диагностических препаратов.

Принципы, позволяющие подтвердить позитивный результат выявления анти-ВГС, прежде всего включают: возможность в некоторых случаях получения более четких результатов ферментативной реакции при взаимодействии с отдельными пептидами, а также применение в диагностикуме расширенного спектра пептидов, которые не используются в скрининговых тестах.

Только введение новых пептидов позволяет повысить диагностическую ценность подтверждающих тестов. Трактовка полученных результатов, например в таком тесте, как RIBA-III, включает три возможных ответа : позитивный, негативный и неопределенный результат.

Последний из них выдается в случае отсутствия четких показаний согласно инструкции, прилагаемой к диагностическому набору , позволяющих определенно судить о наличии или отсутствии анти-ВГС в исследуемом образце. Соотношение спектра регистрируемых ответов при проведении подтверждающих тестов колеблется в зависимости от характеристик групп пациентов, у которых первично выявлены анти-ВГС [18].

По данным J. Pawlotsky с соавт. На наш взгляд, правомочность ответа - "неопределенный результат выявления анти-ВГС", выдаваемого лабораторным работником клиницисту, очевидна не только при проведении подтверждающего теста, но и рутинном исследовании на наличие анти-ВГС. Необходимость такой трактовки полученных результатов является отражением современного состояния лабораторной диагностики гепатита С. По данным Stevensona D. Вместе с тем, по мнению Pawlotsky J. Возможность определения антигенов ВГС привлекала внимание исследователей сразу же после открытия вируса.

Принципиальная возможность их тестирования была продемонстрирована К. Krawczynski с соавторами [23], которые иммуногистохимически обнаружили в печеночной ткани антигены ВГС, доказав специфичность иммунофлюоресцентного свечения.

В качестве цели детекции был избран Core антиген ВГС, который определяют при помощи твердофазного варианта ИФА, сконструированного на основе моноклональных антител. Первые исследования по применению этих тестов определили их высокую чувствительность, специфичность, и перспективность применения, прежде всего, в службе переливания крови [25,26].

Современный этап лабораторной диагностики гепатита С можно охарактеризовать как этап начала широкого применения молекулярно - биологических методов выявления РНК ВГС. Принципам конструирования диагностических препаратов и их применению для детекции вирусных ДНК или РНК посвящено значительное количество литературных обзоров, опубликованных как в отечественных [28], так и зарубежных изданиях [29]. Все эти методы можно разделить на две группы, в основе которых лежит применение принципов гибридизации без амплификации избранного участка нуклеиновой кислоты или с их амплификацией, что позволяет значительно повысить разрешающую способность метода.

Метод гибридизации основан на соединении меченных гибридизационных зондов генноинженерные или синтетические молекулярные структуры, содержащие в себе нуклеотидные последовательности, комплементарные избранным участкам РНК.

Учет результатов осуществляют по интенсивности сигнала, поступающего от метки в составе образовавшегося комплекса. При гепатите С этот метод выявления РНК ВГС прежде всего нашел применение для ее идентификации непосредственно в гепатоцитах, в тестах обозначаемых - in situ hibidization [30].

Возможность непосредственной детекции РНК ВГС в ткани позволила обнаружить ее в мононуклеарных клетках крови, клетках слюнных желез и других тканях организма больного гепатитом С [31,32]. Метод полимеразнной цепной реакции - в настоящее время наиболее широко применяемый методический прием, лежащий в основе практически всех молекулярно-биологических методов детекции РНК ВГС. Причем определение РНК ВГС возможно как в качественном, так и количественном варианте, что особенно важно для назначения, мониторинга и оценки эффективности применяемой терапии.

В его основе лежит многоцикловой процесс, напоминающий естественную репликацию нуклеиновой кислоты, причем каждый цикл состоит из последовательных этапов.

Это сделало предпочтительным выбор праймеров из этой зоны РНК ВГС и их применение в диагностических тест-системах, выпускаемых у нас в стране и за рубежом. В настоящее время в качестве источника этого фермента чаще всего используют бактерии Thermophilus termus Tth-полимераза или Thermophilus aquaticus Taq-полимераза. Обладая термостабильностью в присутствии ионов марганца и магния, этот фермент может быть одновременно использован для синтеза комплементарных одноцепочечных молекул кДНК ВГС и амплификации избранных участков кДНК.

Многократное повторение циклов реакции приводит к накоплению фрагментов кДНК ВГС, которые возможно зарегистрировать при помощи электрофореза в полиакриламидном геле с последующей визуальной детекцией или же с применением гибридизации с олигонуклеотидными зондами, что увеличивает чувствительность и специфичность применяемых диагностических препаратов.

Применение праймеров, меченных ферментами, позволяет проводить учет результатов ПЦР при помощи иммуноферментного анализа. Постоянная цель, стоящая перед исследователями, конструирующими диагностические системы для выявления РНК ВГС, - повышение чувствительности и специфичности. Отличительной особенностью этого метода от "классического" является одновременное использование двух пар праймеров, одна из которых комплементарно связывается с внутренним участком ампликона, полученного после первого раунда амплификации.

Вместе с тем считается, что при этом варианте ПЦР более высок риск контаминации образцов, что может привести к ложноположительным результатам [35]. Острая потребность в определении РНК ВГС и сложности, связанные с крупномасштабным производством высокочувствительных и специфичных диагностических наборов для ПЦР диагностики, определили широкое применение препаратов, изготовленных в научных лабораториях. Сравнение этих тест-систем, так называемых - "домашних" тестов "in house tests" , продемонстрировало их высокую вариабельность по чувствительности и специфичности, а также отсутствие воспроизводимости результатов между лабораториями и сериями диагностических препаратов.

Подобный результат отмечен и в нашей стране, во время проведения аналогичной работы в рамках Федеральной системы внешнего контроля качества г. При ложноотрицательных результатах: - потеря или разрушение РНК ВГС в ходе подготовки к реакции клинического материала; - наличие в образце ингибиторов, влияющих на различные компоненты ПЦР. Эти ингибиторы представлены различными химическими или белковыми субстанциями. Например: наличие в спермальной жидкости ингибиторов обратной транскриптазы не позволяло обнаружить РНК ВГС и говорить о возможности реализации полового пути передачи гепатита С [38]; наличие гепаприна [39]; высокий уровень криоглобулинов в сыворотке крови [40]; - несоблюдение теплового режима хранения и транспортировки клинического материала.

Массовое внедрение ПЦР диагностики по определению РНК ВГС поставило перед органами практического здравоохранения задачи перехода на новый уровень проведения лабораторных исследований. Выделение изолированных зон для осуществления основных этапов ПЦР для подготовки проб; проведения амплификации; для учета полученных результатов ; отдельный комплект для каждого этапа реакции лабораторной одежды, автоматических пипеток; существование стандартных диагностических наборов и самое главное — наличие высококвалифицированных лабораторных сотрудников позволяет снизить уровень появления ложных результатов.

За прошедшие годы наборы для выявления РНК ВГС прошли эволюцию, основной целью которой стало повышение их чувствительности и специфичности.

Использование фермента - амперазы и дезиксиуридинтрифосфата dUTP позволяет разрушать в первом цикле амплификации предшествующие апликоны, которыми могла произойти контаминация.

Комплекс маркеров гепатита С (ИФА)

Михайлов, Институт эпидемиологии и микробиологии им. При постановке диагноза "гепатит С" необходимо учитывать следующие наиболее важные факторы:. Основой лабораторной диагностики гепатита С служат знания о ВГС, его репликации, информация о динамике появления и исчезновения маркеров инфицирования, а также современные иммунохимические и молекулярно-биологические методы детекции антигенов, антител и нуклеиновых кислот. ВГС впервые был идентифицирован в году, когда группа исследователей во главе с М. Houghton и Choo Q.

Вирусный гепатит С. Анализы для первичного выявления заболевания. Обследование контактных лиц

Кирова и Кировской области! Важность коллективного иммунитета. Все виды санитарно-эпидемиологических экспертиз, лабораторных исследований. Главная О центре Специальная оценка условий труда Противодействие коррупции Программное обеспечение Контактная информация. Новости Статьи

Диагностика инфекций

По всем вопросам, связанным с COVID , включая заявки на выполнение тестирования, обращайтесь по телефону. Услуг заказано: 0 На сумму: 0 руб. Результаты поиска: Количество результатов: 0. Версия для печати. Какой биоматериал можно использовать для исследования? Он способен размножаться в клетках крови нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах и ассоциирован с развитием криоглобулинемии, болезни Шегрена и В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Среди всех возбудителей вирусных гепатитов у ВГС наибольшее количество вариаций, а благодаря высокой мутационной активности он способен избегать защитных механизмов иммунной системы человека. Существует 6 генотипов ВГС, не исключена возможность инфицирования человека одновременно несколькими вирусами с различными генотипами. Их появление в крови свидетельствует о возможной инфицированности или ранее перенесенной инфекции.

Пользуясь настоящим веб-сайтом, вы даете свое согласие на использование файлов cookies. Взятие крови ,

Серологические маркеры инфекций. Анализы и цены

Глава IX. Потребность в быстрых простых тестах при скрининге маркеров инфекций у доноров крови. Глава VII. Результаты Российских государственных испытаний тест-систем для выявления ВИЧ-инфекции. Чумакова РАМН.

Обращаем ваше внимание на то, что в связи с эпидемиологической ситуацией сроки выполнения тестов могут быть увеличены.

.

Комментариев: 4

  1. Pleshakova-1960:

    НЕТ, А вам бы только все опошлить….Хорошие советы и правильные!!!!

  2. bazhanova:

    ТАКИЕ ФОТО ДАЮТ МНЕ НАДЕЖДУ ЧТО ЕСТЬ НА ЗЕМЛЕ МНОГО ПРЕКРАСНЫХ ЛЮДЕЙ. И БЛАГОСЛОВИТ ИХ ГОСПОДЬ БОГ !

  3. ooo_kolibri:

    могу только сказать одно. решение об этом будем принимать не мы .Пожелаем удачи тем. кто придет после нас.

  4. Сафронова:

    Ирина, простите за нескромность, Вы на каком десятке лет жизни? Работаете или на пенсии?